bsp甲基化扩增得到的pcr产物可否直接测序,为什么需要构建ta克隆后测序?
该PCR产物理论上是一个复合物,测序结果理论上是套峰,因为单个CpG位点甲基化是有概率的,%-1%都可能。
PCR产物通常被定义为单链DNA序列,而该产物是复合物,其结构较为复杂,由于CpG位点甲基化的概率是随机且独立的,因此测序结果可能呈现套峰现象,其峰的宽度和位置取决于测序工具的性能以及CpG位点甲基化的发生概率,理论上,CpG位点甲基化是随机发生的,因此测序结果的不确定性是不可避免的,且理论上可以达到%到1%的概率范围。
直接测序PCR产物可能并不理想,因为其结构复杂,且测序结果可能受到多种因素的影响,构建T克隆后测序方案,能够更好地捕捉到CpG位点甲基化的潜在变化,从而提高测序的准确性和可靠性。
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